H&E lekesi - H&E stain

Hematoksilen ve eozin ile boyanmış retina ( gözün bir kısmı ) , hücre çekirdekleri mavi-mor boyanmış ve hücre dışı materyal pembe boyanmıştır.

Hematoksilen ve eozin boyası ( veya hematoksilen ve eozin boyası veya hematoksilin-eozin boyası ; genellikle H&E boyası veya HE boyası olarak kısaltılır ), histolojide kullanılan başlıca doku boyalarından biridir . Tıbbi tanıda en yaygın kullanılan lekedir ve genellikle altın standarttır . Örneğin, bir patolog şüpheli bir kanserin biyopsisine baktığında , histolojik bölümün H&E ile boyanması muhtemeldir.

H&E, iki histolojik lekenin birleşimidir: hematoksilin ve eozin . Hematoksilin, hücre çekirdeklerini morumsu bir maviye boyar ve eozin, hücre dışı matrisi ve sitoplazmayı pembeye boyar, diğer yapılar farklı tonlar, tonlar ve bu renklerin kombinasyonlarını alır. Bu nedenle bir patolog, bir hücrenin nükleer ve sitoplazmik kısımlarını kolayca ayırt edebilir ve ek olarak, lekeden elde edilen genel renklenme modelleri, hücrelerin genel düzenini ve dağılımını gösterir ve bir doku örneğinin yapısına genel bir bakış sağlar. Böylece, örüntü tanıma, hem uzman insanlar kendileri tarafından ve bu uzmanlara yardımcı yazılım tarafından (de dijital patoloji ), histolojik bilgi sağlar.

Bu leke kombinasyonu ilk olarak 1876'da A. Wissowzky tarafından tanıtıldı.

kullanır

H&E boyama prosedürü, kısmen hızlı bir şekilde yapılabilmesi, pahalı olmaması ve dokuları önemli miktarda mikroskobik anatomiyi ortaya çıkaracak şekilde boyaması nedeniyle histolojideki başlıca boyamadır . histopatolojik durumlar. H&E boyamasından elde edilen sonuçlar , dokuyu sabitlemek için kullanılan kimyasala veya laboratuvar protokolündeki hafif tutarsızlıklara aşırı derecede bağımlı değildir ve bu faktörler histolojide rutin kullanımına katkıda bulunur.

H&E boyama tüm dokuları, hücresel yapıları veya kimyasal maddelerin dağılımını ayırt etmek için her zaman yeterli kontrast sağlamaz ve bu durumlarda daha spesifik boyamalar ve yöntemler kullanılır.

Uygulama metodu

Hematoksilin lekesi banyosundan çıkarılan slayt rafı.

H&E prosedüründe kullanılan hematoksilin solüsyonlarını (formülasyon) hazırlamanın birçok yolu vardır, ayrıca H&E boyalı slaytlar üretmek için bazıları belirli bir laboratuvara özgü olabilen birçok laboratuvar protokolü vardır . Standart bir prosedür olmamasına rağmen, hücre çekirdeklerinin mavi boyanması ve sitoplazmanın ve hücre dışı matrisin pembe boyanması bakımından geleneksel sonuçlar makul ölçüde tutarlıdır . Histoloji laboratuvarları, belirli bir patolog için boyama miktarını veya türünü de ayarlayabilir.

Dokular toplandıktan (genellikle biyopsi olarak ) ve sabitlendikten sonra, bunlar tipik olarak kurutulur ve erimiş parafin mumuna gömülür , elde edilen blok bir mikrotom üzerine monte edilir ve ince dilimler halinde kesilir. Dilimler mikroskop lamlarına yapıştırılır, bu noktada mum bir çözücü ile çıkarılır ve lamlara bağlı doku dilimleri yeniden hidratlanır ve boyamaya hazır hale gelir. Alternatif olarak, H&E boyası Mohs cerrahisinde dokuların tipik olarak dondurulduğu, bir kriyostat (donmuş dokuyu kesen bir mikrotom) üzerinde kesildiği, alkolde sabitlendiği ve ardından boyandığı en çok kullanılan lekedir.

H&E boyama yöntemi, metalik bir tuz veya mordan ile karıştırılmış hematoksilin uygulamasını, ardından fazla lekelenmeyi gidermek için zayıf asit solüsyonunda durulamayı ( farklılaştırma ) ve ardından hafif alkali suda mavileştirmeyi içerir . Haematoksilin uygulanmasından sonra, doku bir zıt eozin ile (en sık Y eosin ).

Sonuçlar

Hematoksilin esas olarak hücre çekirdeklerini keratohyalin granülleri ve kalsifiye materyal gibi birkaç diğer doku ile birlikte mavi veya koyu-mor renklendirir . Eozin, sitoplazmayı ve kolajen gibi hücre dışı matrisi içeren diğer bazı yapıları pembenin beş tonuna kadar boyar . Eozinofilik yapıları (eozin ile boyanır maddeler), genel olarak hücre-içi ya da hücre dışı oluşan proteinler . Lewy cisimcikleri ve Mallory organları eozinofilik yapıların örnekleridir. Çoğu sitoplazma eozinofilik ve pembe oluşturulur. Kırmızı kan hücreleri yoğun kırmızı boyanır.

Aksiyon modu

Her ne kadar hematein , bir oksitlenmiş hematoksilin formu, (sabitleştirici ile kombine) aktif renklendiricidir, leke hala olarak ifade edilir hematoksilin . Hematoksilin, bir mordanla (en yaygın olarak alüminyum şap ) birleştirildiğinde genellikle bazik, pozitif yüklü veya katyonik bir lekeye "benzediği" kabul edilir . Eozin, anyonik (negatif yüklü) ve asidik bir lekedir. Çekirdeklerin hemalum (alüminyum iyonları ve hematinin bir kombinasyonu) ile boyanması normalde boya-metal kompleksinin DNA'ya bağlanmasından kaynaklanır, ancak doku kesitlerinden DNA ekstraksiyonundan sonra nükleer boyama elde edilebilir. Mekanizma, tionin veya toluidin mavisi gibi bazik (katyonik) boyalarla nükleer boyamadan farklıdır . Bazik boyalarla boyama, yalnızca hemalumdan daha az asidik olan çözeltilerden meydana gelir ve nükleik asitlerin önceden kimyasal veya enzimatik ekstraksiyonu ile önlenir. Alüminyum ve hematini bir arada tutanlara benzer koordinat bağlarının, hemalum kompleksini DNA'ya ve nükleer kromatindeki karboksi protein gruplarına bağladığını gösteren kanıtlar vardır .

Yapıların bazofilik ve eozinofilik olarak adlandırılması için asidik veya bazik olması gerekmez; terminoloji, boyalar için hücresel bileşenlerin afinitesine dayanmaktadır. Örnekte diğer renkler, örneğin sarı ve kahverengi bulunabilir; melanin gibi içsel pigmentlerden kaynaklanırlar . Bazal laminalar , iyi görünür olmaları gerekiyorsa, PAS boyası veya bazı gümüş boyalarla boyanmalıdır . Retiküler lifler ayrıca gümüş leke gerektirir. Hidrofobik yapılar da temiz kalma eğilimindedir; bunlar genellikle yağlar, örneğin adipositler , nöron aksonlarının etrafındaki miyelin ve Golgi aygıtı zarları bakımından zengindir .

H&E lekeli doku örnekleri

Referanslar

daha fazla okuma

  • Kiernan JA (2008) Histolojik ve Histokimyasal Yöntemler: Teori ve Uygulama. 4. baskı. Bloxham, Birleşik Krallık: Scion.
  • Lillie RD, Pizzolato P, Donaldson PT (1976) Çözünür metakrom mordan lake boyaları ile nükleer boyalar. Kimyasal son grup bloke edici reaksiyonların etkisi ve asit gruplarının dokulara yapay girişi. Histokimya 49: 23-35.
  • Llewellyn BD (2009) Alum-hematoksilen ile nükleer boyama. Biyoteknoloji. Histokem. 84: 159–177.
  • Puchtler H, Meloan SN, Waldrop FS (1986) Mevcut kimyasal kavramların metal-hematein ve -brazilein lekelerine uygulanması. Histokimya 85: 353-364.

Dış bağlantılar

Protokol